桌面式荧光相关光谱单分子分析仪
Fluorescence Correlation Spectroscopy Single Molecule Analyzer
广东中科奥辉科技有限公司
SX300
样品制备与分析平台
卫光生命科学园1A栋305
刘冰如
18800302621
liubingru@smart.org.cn
1.分子或纳米颗粒的浓度线性测量范围:10pN-100nM。
2.分子或纳米颗粒的流体动力学半径检测下限:≤10nm。
3.分子相互作用的解离常数(KD)常数测量范围:pM-μM。
4.单分子短促英冠信号分析:支持计算荧光共振能量转移效率。
5.信号采集光路:仪器内部集成共聚焦光路,共聚焦体积≤2fL。
6.激光器类型:连续光或皮秒脉冲光;激光器类型至少包含488nm、561nm、638nm。
7.激光器输出功率:连续可调;激光器最大输出功率:≥20mW。
8.样品台:X、Y、Z三轴自动定位样平台,可实现18个样品的批量检测,样品仓自动测量个记录实验温度。
9.温控系统:具有三个温度探头实时测量温度数据(样品仓体、样品仓盖、样品),控制精度为室温波动范围±1℃环境下±0.3℃,控制范围:室温+3℃到50℃。
10.相关数据采集卡:可实时输出两个通道的自相关和一个通道的交相关数据,最小相关时间小于1000ms。
11.数据采集软件:一键共聚焦针孔全自动校准,可自定义设置数据采集时间、重复次数、一键启动/停止,支持实时展示荧光光强信号、荧光自相关和交相关衰减曲线。
12.数据分析软件:内置多个分析模型可供选择,具有分子三维自由扩散分析模型、荧光三重态分析模型、异常扩散模型等。支持分子浓度、分子流体动力学半径、扩散系数等检测计算。可自动或手动设置拟合初值,可一键式数据拟合。
样品准备注意事项:
1、尽量准备新鲜、纯度较高的样品,除自发荧光样品外(如 AIE 材料、量子点等),要求样品通过化学标记(推荐氨基标记)或融合荧光蛋白,且能够被 DEMO 机配备的 488/561/638nm 激光器激发,同时激发后样品的stokes shift 不应过长(应在对应探测器的滤光检测范围内)。需要准备好样品标记的对应染料单独检测做对照(例如:样品标记了 Alexa 647,则需要准备游离的Alexa647 染料),建议浓度 1-100nM、体积 50~100μL 即可;
2、根据实验目的,准备合适分量的样品、buffer,同时可进行适当分装,最好同时准备高浓度和低浓度的样品;
3、样品种类与上样量:可使用均相溶液、细胞裂解液样品,但介质需为水相,且不可使用活细胞样品、或有机溶剂含量过高(>50%)的样品。一般而言, FCS 实验单次上样的体积≥10μL,若采集时间较长,则需要加大上样量,避免样品挥发带来的影响,故一般推荐上样量为 30~100μL;此外,FCS 实验的最佳上样浓度为 1-10nM,若样品光量子效率低,可提高上样浓度,反之,降低上样浓度。
4、缓冲液要求:实验中所需要用到的各种缓冲液的背景信号不宜过高,越干净越好,有条件的情况请使用0.1μm 或 0.22μm 的滤器过滤,且需要满足以下条件:
①缓冲液不应使用已污染或易被污染的 buffer,最好使用商品化的buffer;
②缓冲液中尽量避免加入表面活性剂(如Triton X100 等),若无法避免,则需要控制用量,用量不应超过总反应体系0.5%;
③避免使用会影响溶液粘稠度的试剂,如甘油等。
应用荧光相关光谱技术和荧光交相关光谱技术定量检测溶液样品或细胞裂解液中的分子或纳米颗粒的浓度、分子大小、分子间相互作用、构象变化等。